Προσδιορισμός της Ουριδίνης 5'-Μονοφωσφορικής σε Ενισχυτικά Διατροφής Τροφίμων με Υγρή Χρωματογραφία Υψηλής Απόδοσης

Ως νουκλεοτίδιο, το 5'-μονοφωσφορικό ουριδίνη (UMP) είναι ένα κρίσιμο ενδιάμεσο στον μεταβολισμό των νουκλεϊκών οξέων στους ζωντανούς οργανισμούς. Είναι το πιο άφθονο νουκλεοτίδιο στο μητρικό γάλα των θηλαστικών και η διατροφική απαίτηση για ουριδυλάτη είναι σημαντικά υψηλότερη από ό,τι για άλλα νουκλεοτίδια κατά την ανάπτυξη και την εξέλιξη των απογόνων. Τα τελευταία χρόνια, η έρευνα έχει αποκαλύψει ότι το UMP όχι μόνο συμμετέχει στον ενεργειακό μεταβολισμό και τη σύνθεση RNA, αλλά ενισχύει επίσης τη λειτουργία του εντερικού φραγμού ρυθμίζοντας κυτταρικές οδούς σηματοδότησης. Επιπλέον, δρα συνεργιστικά με τις λιποδιαλυτές βιταμίνες για την προώθηση της απορρόφησης θρεπτικών συστατικών και της ανοσολογικής λειτουργίας. Το UMP προστίθεται συνήθως ως θρεπτικός ενισχυτής σε βρεφικά γάλατα και ζωοτροφές/πτηνοτροφές, όπου η καθαρότητα και η συγκέντρωσή του επηρεάζουν άμεσα τη θρεπτική αξία και την ασφάλεια του τελικού προϊόντος.

Λέξεις κλειδιά:Ενισχυτικό διατροφής τροφίμων, UMP, Νουκλεοτίδια, Υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης.

1. Όργανα και Αντιδραστήρια

1.1 Λίστα διαμόρφωσης HPLC

Πίνακας 1 Λίστα διαμόρφωσης HPLC

1.2 Αντιδραστήρια και Πρότυπα

Πίνακας 2 Λίστα αντιδραστηρίων και προτύπων

1.3 Πειραματικό υλικό και βοηθητικός εξοπλισμός

Υπερηχητικός καθαριστής

Αναμίκτης Vortex

2. Μέθοδος και συνθήκες πειράματος

Χρωματογραφική στήλη: Nova Element AQC18, 5μm 4.6x250mm.

3. Αποτέλεσμα πειράματος

3.1 Δοκιμή καταλληλότητας συστήματος

Η δοκιμή καταλληλότητας του συστήματος έδειξε ότι η στοχευμένη κορυφή ήταν καλά διαμορφωμένη, με υψηλό αριθμό θεωρητικών πλακών και χωρίς παρεμβαλλόμενες κορυφές στην περιοχή της, πληρώντας έτσι όλες τις πειραματικές απαιτήσεις.

Εικ. 1 Χρωματογράφημα του πρότυπου διαλύματος εργασίας 5'-μονοφωσφορικής ουριδίνης

Πίνακας 3 Αποτελέσματα δοκιμών για το πρότυπο διάλυμα εργασίας 5'-μονοφωσφορικής ουριδίνης

3.2 Δοκιμή επαναληψιμότητας

Το πρότυπο διάλυμα εργασίας 5'-μονοφωσφορικής ουριδίνης (UMP) εγχύθηκε έξι φορές. Η σχετική τυπική απόκλιση (RSD) του χρόνου κατακράτησης ήταν 0.085% και αυτή του εμβαδού κορυφής ήταν 0.191%. Και οι δύο τιμές ήταν κάτω από το καθορισμένο όριο του 2.0%, αποδεικνύοντας τη συμμόρφωση με τις πειραματικές απαιτήσεις.

Εικ. 2 Χρωματογραφήματα της δοκιμής επαναληψιμότητας 5'-μονοφωσφορικής ουριδίνης (UMP)

Πίνακας 4 Αποτελέσματα δοκιμής επαναληψιμότητας για 5'-μονοφωσφορική ουριδίνη (UMP)

3.3 Δοκιμή δείγματος

Το εμβαδόν κορυφής του πρότυπου διαλύματος εργασίας 5'-μονοφωσφορικής ουριδίνης (20mg/L) ήταν 322.525, ενώ αυτό του διαλύματος δοκιμής δείγματος ήταν 274.211. Με βάση τη μέθοδο εξωτερικού προτύπου, η περιεκτικότητα σε UMP στο δείγμα προσδιορίστηκε ότι ήταν 17mg/L.

Εικ. 3 Χρωματογράφημα του δείγματος δοκιμής

Πίνακας 5 Αποτελέσματα δοκιμής δείγματος

3.4 Δοκιμή καταλληλότητας συστήματος για σχετικές ουσίες

Η δοκιμή του διαλύματος καταλληλότητας συστήματος για σχετικές ουσίες έδειξε ότι όλες οι κορυφές των ενώσεων ήταν καλά διαμορφωμένες, με υψηλούς αριθμούς θεωρητικών πλακών και διαχωρισμό μεγαλύτερο από 2.0, πληρώντας έτσι τις πειραματικές απαιτήσεις.

Εικ. 4 Χρωματογράφημα του πρότυπου διαλύματος εργασίας 5'-μονοφωσφορικής ουριδίνης (UMP)

Πίνακας 6 Αποτελέσματα δοκιμής για το πρότυπο διάλυμα εργασίας 5'-μονοφωσφορικής ουριδίνης (UMP)

3.5 Δοκιμή αναπαραγωγιμότητας δείγματος

Μετά από έξι συνεχόμενες εγχύσεις του διαλύματος καταλληλότητας συστήματος, η επαναληψιμότητα του χρόνου κατακράτησης για 5'-UMP, ουρακίλη και ουριδίνη ήταν 0.031%, 0.058% και 0.102%, αντίστοιχα, ενώ η επαναληψιμότητα του εμβαδού κορυφής ήταν 0.243%, 0.134% και 0.134%, αντίστοιχα, πληρώντας τις πειραματικές απαιτήσεις.

Εικ. 5 Χρωματογράφημα της δοκιμής αναπαραγωγιμότητας δείγματος

Πίνακας 7 Αποτελέσματα δοκιμής για την επαναληψιμότητα του χρόνου κατακράτησης σχετικών ουσιών

Πίνακας 8 Αποτελέσματα δοκιμής για την επαναληψιμότητα του εμβαδού κορυφής σχετικών ουσιών

3.6 Δοκιμή ευαισθησίας για σχετικές ουσίες

Η αναλογία σήματος προς θόρυβο της κύριας κορυφής 5'-UMP στο διάλυμα δοκιμής ευαισθησίας για σχετικές ουσίες είναι σημαντικά μεγαλύτερη από 3, πληρώντας τις πειραματικές απαιτήσεις.

Εικ. 6 Χρωματογράφημα του διαλύματος δοκιμής ευαισθησίας σχετικών ουσιών

Πίνακας 9 Αποτελέσματα δοκιμής του διαλύματος ευαισθησίας σχετικών ουσιών

3.7 Δοκιμή σχετικών ουσιών αναφοράς και διαλυμάτων δείγματος

Το εμβαδόν κορυφής του διαλύματος αναφοράς (17 mg/L) ήταν 275.856. Το συνολικό εμβαδόν κορυφής των ακαθαρσιών στο διάλυμα δοκιμής, εξαιρουμένης της 5'-μονοφωσφορικής ουριδίνης, ήταν 38.021. Υπολογισμός με τη μέθοδο εξωτερικού προτύπου, η περιεκτικότητα σε ακαθαρσίες στο δείγμα είναι 2.343mg/L.

Εικ. 7 Χρωματογράφημα της δοκιμής διαλύματος αναφοράς σχετικών ουσιών

Πίνακας 10 Αποτελέσματα δοκιμής του διαλύματος αναφοράς σχετικών ουσιών

Εικ. 8 Χρωματογράφημα της δοκιμής διαλύματος δείγματος σχετικών ουσιών

Πίνακας 11 Αποτελέσματα δοκιμής για το διάλυμα σχετικού δείγματος

4. Συμπέρασμα

Σε αυτό το πείραμα, με αναφορά στο "GB 1903.69-2024 Εθνικό Πρότυπο Ασφάλειας Τροφίμων: Ενισχυτικό διατροφής τροφίμων 5'-μονοφωσφορική ουριδίνη", η ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα σύστημα υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης Wayeal LC3200 εξοπλισμένο με ανιχνευτή υπεριώδους. Τα πειραματικά αποτελέσματα δείχνουν ότι η δοκιμή καταλληλότητας του συστήματος έδειξε καλά σχήματα κορυφών για όλες τις ενώσεις, υψηλούς αριθμούς θεωρητικών πλακών και διαχωρισμό άνω του 2.0, πληρώντας τις πειραματικές απαιτήσεις. Η επαναληψιμότητα του χρόνου κατακράτησης για το πρότυπο διάλυμα εργασίας 5'-μονοφωσφορικής ουριδίνης και σχετικών ουσιών ήταν κάτω από 0.2% και η επαναληψιμότητα του εμβαδού κορυφής ήταν κάτω από 0.3%, υποδεικνύοντας καλή αναπαραγωγιμότητα. Το διάλυμα δοκιμής ευαισθησίας για σχετικές ουσίες έδειξε αναλογία σήματος προς θόρυβο για την κύρια κορυφή 5'-μονοφωσφορικής ουριδίνης σημαντικά μεγαλύτερη από 3, εκπληρώνοντας τις πειραματικές απαιτήσεις. Όλα τα αποτελέσματα των δοκιμών δειγμάτων ήταν φυσιολογικά. Τα παραπάνω δεδομένα πληρούν τις απαιτήσεις των οργάνων που καθορίζονται στην τυπική μέθοδο.