Προσδιορισμός Νιτροζαμινικών Προσμείξεων σε Δισκία Υδροχλωρικής Προπρανολόλης με Υγρή Χρωματογραφία

Κλειδιά: προπρανόλολη, υγρή χρωματογραφία υψηλών επιδόσεων, ακαθαρσίες νιτροζαμινών

1. Όργανα και αντιδραστήρες

1.1 Κατάλογος διαμορφώσεων συστήματος HPLC

1.2 Αντιδραστήρες και τυποποιημένες λύσεις

Πίνακας 2 Αντιδραστήρες και τυποποιημένες λύσεις

1.3 Πειραματικά υλικά και βοηθητικός εξοπλισμός

Υπερήχθη καθαριστικό

Συσκευή ανάμιξης στρογγυλοειδών

2. Μέθοδος πειράματος

2.1 Προετοιμασία του διαλύματος

2.1.1 2mol/L διάλυμα υδροξειδίου του νατρίου: Πάρτε 4g υδροξειδίου του νατρίου, διαλύστε το σε 50 ml νερού και αναμείξτε καλά.

2.1.2 Ακετονιτρίλιο-νερό-ζυφρικό οξύ (55:45:0.1) Μείγμα: Παίρνουμε 1,6 g θειικού νάτριο dodecyl και 0,31 g φωσφορικού διυδρογόνου τετραβουτυλαμονίου, προσθέτουμε 1 ml θειικού οξέος, 450 ml νερού και 550 ml ακετονιτρίλης.3 με διάλυμα υδροξειδίου του νατρίου 2 mol/l, και αναμιγνύεται καλά.

2.1.3 Διαλύτης: Το ίδιο με την κινητή φάση.

2.1.4 Γραμμικό διάλυμα: ζυγίζεται με ακρίβεια η κατάλληλη ποσότητα του προτύπου αναφοράς N-Νιτροζο-προπανόλολης,διαλύεται και αραιώνεται με κινητή φάση για να λαμβάνεται διάλυμα που περιέχει περίπου 200 ng ανά 1 ml ως το τυποποιημένο βασικό διάλυμαΣτη συνέχεια, μεταφέρετε με ακρίβεια κατάλληλους όγκους του αποθεματικού διαλύματος σε έξι 100 ml χωρομετρικές φιάλες, αραιωμένες στο σημείο με κινητή φάση,και αναμειγνύεται καλά για να παρασκευαστεί μια τυποποιημένη σειρά καμπυλών εργασίας με συγκεντρώσεις 00,8ng/mL, 1ng/mL, 2ng/mL, 3ng/mL, 4ng/mL και 6ng/mL.

2.1.5 Πρότυπο αναφοράς Λύση: Ζυγίζει με ακρίβεια κατάλληλη ποσότητα του προτύπου αναφοράς N-Νιτροζο-προπανόλολης,διαλύεται και αραιώνεται με κινητή φάση για να παρασκευαστεί διάλυμα που περιέχει περίπου 2 ng N-Νιτροζοπροπανόλολης ανά 1 ml ως πρότυπο διάλυμα αναφοράς.

2.2 Προετοιμασία δείγματος

2.2.1 Δοκιμαστικό διάλυμα: ζυγίζει με ακρίβεια μια κατάλληλη ποσότητα δισκίων μικροσκοπικής σκόνης υδροχλωριόλης προπρανόλολης, διαλύει και αραιώνει με κινητή φάση για να παρασκευάσει ένα διάλυμα που περιέχει περίπου 0.27 mg προπρανόλη ανά 1 ml ως διάλυμα δείγματος.

2.2.2 Ακριβότητα Λύσιμο: ζυγίστε με ακρίβεια περίπου 297 mg δισκίων υδροχλωριούχου προπρανόλολης σε λεπτό σκόνη σε μια χωρητική φιάλη 100 ml.Προστίθεται κατάλληλη ποσότητα του βασικού διαλύματος αναφοράς N-Νιτροζο-προπανολόλης, διαλύεται και αραιώνεται μέχρι το σημάδι με κινητή φάση για να παρασκευαστεί ένα δείγμα με 100% αμιγία.

3Το αποτέλεσμα του πειράματος.

3.1 Ειδικότητα

Σχήμα 2 Χρωματογράφημα ειδικότητας

Σημείωση: Ο διαλύτης δεν παρεμβαίνει στην ανίχνευση της N-Νιτροζοπροπανόλολης,και οι χρωματογραφικές κορυφές άλλων προσμείξεων στο δοκιμαστικό διάλυμα δεν παρεμβαίνουν επίσης στον προσδιορισμό της προσμείξεως N-Νιτροζο-προπανόλολης.

3.2 Γραμμική δοκιμή

Σχήμα 3 Τεχνική καμπύλη ακαθαρσίας N-Νιτροζο-προπανόλολης

Σημείωση: Τα πειραματικά αποτελέσματα δείχνουν ότι ο συντελεστής συσχέτισης (R) της καμπύλης δοκιμής ακαθαρσίας N-Νιτροζο-προπανόλολης υπερβαίνει το 0.999, που πληρούν τις απαιτήσεις της δοκιμής.

3.3 Δοκιμή επαναληψιμότητας

Σχήμα 4 Χρωματογράμματα έξι αναπαραγωγικών ενέσεων για πρότυπο 2ng/ml

Πίνακας 3 Δεδομένα έξι αναπαραγωγικών ενέσεων για το πρότυπο 2ng/ml

Σημείωση: Όπως φαίνεται στον παραπάνω πίνακα, η επαναληψιμότητα χρόνου διατήρησης της N- νιτροζο- προπαννολόλης είναι 0,043%, και η επαναληψιμότητα περιοχής αιχμής είναι 0, 464%, γεγονός που δείχνει καλή επαναληψιμότητα.

3.4 Δοκιμή ακρίβειας

Σχήμα 5 Χρωματογράφημα ακριβείας N-Νιτροζοπροπανόλολης σε δισκία

Πίνακας 4 Ακρίβεια των δισκίων υδροχλωριούχου προπρανόλολης (N- νιτροζο- προπρανόλολης)

Σημείωση: Η ανάκτηση της N- νιτροζοπροπανόλολης σε έξι δείγματα κυμαινόταν από 96,98% έως 104,71%, με μέση ανάκτηση 101,38%.

3.5 Δοκιμή LOD

Σχήμα 6 Δοκιμαστικό χρωματογράφημα N-Νιτροζο-προπανολόλης σε 2ng/ml τυποποιημένη συγκέντρωση

Πίνακας 5 Δεδομένα δοκιμής αναφοράς N-Νιτροζο-προπανόλολης σε 2ng/ml τυποποιημένη συγκέντρωση

Σημείωση: Με βάση τα δεδομένα δοκιμής για το πρότυπο αναφοράς N-νιτροζο-προπανόλολης σε συγκέντρωση 2ng/ml στον παραπάνω πίνακα,το θεωρητικό όριο ανίχνευσης για την N-νιτροζο-προπανόλολη υπολογίζεται ως 0.151ng/mL, χρησιμοποιώντας ως οριακό κριτήριο ανίχνευσης αναλογία σήματος/θόρυβου 3:1

3.6 Δοκιμασμός δισκίου μάρκας

Σχήμα 7 Δοκιμαστικό χρωματογράφο δισκίων μάρκας

Σημείωση: Η N- νιτροζοπροπανόλη δεν ανιχνεύθηκε στα δισκία της μάρκας.

4Συμπεράσματα

A study on the nitrosamine impurity N-nitroso-propranolol in propranolol hydrochloride tablets was conducted in accordance with the FDA's recently published guidance document on establishing acceptable intake levels for Nitrosamine Drug Substance-Related Impurities (NDSRI)Σύμφωνα με το παρόν έγγραφο, η τιμή ΑΙ (Αποδεκτή πρόσληψη) υπολογίζεται ως 1500 ng/ ημέρα..Η επικύρωση της μεθόδου πραγματοποιήθηκε με τη χρήση της σειράς υγρής χρωματογραφίας υψηλών επιδόσεων (HPLC) της Wayeal®, που είναι εξοπλισμένη με ανιχνευτή υπεριώδους ακτινοβολίας.Τα δείγματα δισκίων αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας την επικυρωμένη μέθοδο ανίχνευσηςΌλα τα παραπάνω δεδομένα συμμορφώνονται με τις απαιτήσεις της φαρμακοποιίας για την οργάνωση.