Καθορισμός πολλαπλών φωσφορικών ουσιών στα τρόφιμα με χρωματογράφο ιόντων

Αυτή η σημείωση εφαρμογής εισάγει τον προσδιορισμό πολλαπλών φωσφορικών αλάτων σε τρόφιμα σύμφωνα με τη Μέθοδο 2 του GB 5009.256-2025 χρησιμοποιώντας το σύστημα χρωματογραφίας ιόντων Wayeal.

Η υπερβολική πρόσληψη φωσφορικών αλάτων μπορεί να διαταράξει τον μεταβολισμό ασβεστίου-φωσφόρου του σώματος, οδηγώντας σε μειωμένη απορρόφηση μετάλλων ή άλλα προβλήματα υγείας. Η ακριβής ανίχνευση βοηθά τις επιχειρήσεις να ελέγχουν επιστημονικά τη χρήση προσθέτων, να εξισορροπούν την ποιότητα και την ασφάλεια των τροφίμων και παρέχει υποστήριξη δεδομένων για τη βελτιστοποίηση των σκευασμάτων.

Λέξεις-κλειδιά:Χρωματογραφία ιόντων, ανιόντα, τρόφιμα.

1. Instrument and Regents

1.1 Λίστα διαμόρφωσης χρωματογράφου ιόντων

Πίνακας 1 Λίστα διαμόρφωσης οργάνου

1.2 Αντιδραστήρια και Πρότυπα

Πίνακας 2 Κατάλογος αντιδραστηρίων και προτύπων

1.3 Υλικό Πειράματος και Βοηθητικός Εξοπλισμός

Υδρόφιλο φίλτρο κονσέρβας τύπου σύριγγας (0,45μm)

Injector (20mL)

2. Πειραματική μέθοδος

2.1 Προεπεξεργασία δείγματος

Ζυγίστε 1-2 g (με ακρίβεια 0,001 g) του δείγματος σε χρωματομετρικό σωλήνα 50 mL. Προσθέστε 22,5 mL διαλύματος υδροξειδίου του νατρίου 100 mmol/L. Ανακατέψτε με στροβιλισμό για 1 λεπτό, στη συνέχεια εκχυλίστε με υπερήχους στους 80°C για 30 λεπτά, ανακινώντας κάθε 5 λεπτά για να διασφαλιστεί η πλήρης διασπορά του δείγματος. Αφού κρυώσει σε θερμοκρασία δωματίου, αραιώστε στα 50 mL με υπερκαθαρό νερό και ανακατέψτε καλά. Μεταφέρετε ολόκληρο το διάλυμα σε σωλήνα φυγοκέντρησης 50 mL και φυγοκεντρήστε με 8.000 r/min για 5 λεπτά. Μετρήστε 5 mL του υπερκειμένου σε άλλο χρωματομετρικό σωληνάριο 50 mL, προσθέστε 1 mL νιτρικού οξέος 30% και αναδεύστε αναδεύοντας. Τοποθετήστε το σωλήνα σε λουτρό νερού στους 90°C °ντο± 5 °C και ζεσταίνουμε για 60 λεπτά. Μετά τη θέρμανση, αφαιρέστε το σωλήνα και ψύξτε τον σε θερμοκρασία δωματίου σε λουτρό κρύου νερού. Τέλος, αραιώστε μέχρι το σημάδι με νερό και ανακατέψτε καλά.

Μεταφέρετε με σιφώνιο 2 mL του διαλύματος σε ένα σωλήνα φυγοκέντρησης 10 mL και, στη συνέχεια, αραιώστε μέχρι τη χαραγή με υπερκαθαρό νερό. Τοποθετήστε το σωληνάριο σε φυγόκεντρο ψυγείου και φυγοκεντρήστε στο 4 °Γ και 8.000 r/min για 5 λεπτά. Συλλέξτε το υπερκείμενο και περάστε το από 0,45μm μεμβράνη φίλτρου. Στη συνέχεια, πάρτε έναν κατάλληλο όγκο του διηθήματος για ανάλυση οργάνων.

Σημείωση: Στην αρχική τυπική μέθοδο, προστίθενται χωριστά 45 mL διαλύματος υδροξειδίου του νατρίου 50 mmol/L. Για τη δοκιμή αυτή, για να διευκολυνθεί η ογκομετρική προσαρμογή λόγω της μεγαλύτερης ποσότητας αιχμής, το διάλυμα εκχύλισης τροποποιήθηκε σε 22,5 mL διαλύματος υδροξειδίου του νατρίου 100 mmol/L που προστέθηκε χωριστά. Αυτή η τροποποίηση δεν επηρεάζει την εγκυρότητα των πειραματικών αποτελεσμάτων.

2.2 Συνθήκες πειράματος

Πίνακας 3 Συνθήκες δοκιμής ανιόντων

3. Αποτέλεσμα πειράματος

3.1 Τυπική χρωματογραφία

Ο προσδιορισμός πολλαπλών φωσφορικών αλάτων στα τρόφιμα σύμφωνα με τη Μέθοδο 2 του GB 5009.256-2025 ολοκληρώθηκε εντός 30 λεπτών. Τα αποτελέσματα των δοκιμών έδειξαν καλή γραμμικότητα και γραμμική επαναληψιμότητα, εξαιρετικά όρια ανίχνευσης και ποσοτικοποίησης, ικανοποιητική ακρίβεια, ισχυρή επαναληψιμότητα δείγματος, αξιόπιστο παραλληλισμό δειγμάτων, σταθερή επαναληψιμότητα δείγματος με ακίδες και εξαιρετικά ποσοστά ανάκτησης. Όλοι οι δείκτες απόδοσης πληρούν τις απαιτήσεις που καθορίζονται στο GB 5009.256-2025 για τον προσδιορισμό πολλαπλών φωσφορικών αλάτων στα τρόφιμα.

Χρωματόγραμμα επικάλυψης τυπικής καμπύλης

3.2 Γραμμικό εύρος

Πάρτε μια κατάλληλη ποσότητα από το πρότυπο διάλυμα και αραιώστε για να προετοιμάσετε την καμπύλη βαθμονόμησης. Η απόκλιση μεταξύ των αποτελεσμάτων γραμμικής ανίχνευσης και των γνωστών συγκεντρώσεων ήταν μικρότερη από τη μέγιστη επιτρεπόμενη απόκλιση, με τιμή R μεγαλύτερη από 0,999, υποδηλώνοντας εξαιρετική γραμμικότητα για κάθε συστατικό.

Πίνακας 4 Πίνακας Γραμμικής Εύρος Φωσφορικών Ιόντων

Αποτελέσματα Γραμμικότητας για Φωσφορικό Ιόν

3.3 Δοκιμή επαναληψιμότητας γραμμικότητας

Χρωματογραφήματα δοκιμής επαναληψιμότητας για τυπική καμπύλη χαμηλής τιμής σημείο S1 με 7 διαδοχικές ενέσεις

Χρωματογραφήματα δοκιμής επαναληψιμότητας για σημείο μέσης τιμής τυπικής καμπύλης S4 με 7 διαδοχικές ενέσεις

Χρωματογραφήματα δοκιμής επαναληψιμότητας για σημείο υψηλής τιμής τυπικής καμπύλης S7 με 7 διαδοχικές ενέσεις

Δεδομένα δοκιμής επαναληψιμότητας για καμπύλη βαθμονόμησης

3.4 Δοκιμή LOD

Χρωματόγραμμα δοκιμής LOD

Δεδομένα δοκιμής LOD

3.5 Δοκιμή ακριβείας

Επικαλυπτόμενα χρωματογραφήματα δύο ανεξάρτητων δοκιμών

Δεδομένα δοκιμής ακριβείας

3.6 Χρωματόγραμμα δοκιμής τυφλού δείγματος

Κενό δείγμα χρωματογράφημα δοκιμής

Κενό δείγμα δεδομένων δοκιμής

3.7 Χρωματογραφήματα δοκιμής παραλληλισμού και επαναληψιμότητας δειγμάτων

Χρωματογραφήματα επικάλυψης παράλληλου δείγματος κατεψυγμένων γαρίδων 1 (8 ενέσεις)

Χρωματογραφήματα επικάλυψης παράλληλου δείγματος κατεψυγμένων γαρίδων 2 (8 ενέσεις)

Δεδομένα δοκιμής κατεψυγμένων γαρίδων

3.8 Δείγμα Spiking και Spike Repeatability Test

Χρωματόγραμμα επικάλυψης κατεψυγμένων γαρίδων 50% με καρφιά (8 ενέσεις)

Δεδομένα δοκιμής επαναληψιμότητας για κατεψυγμένες γαρίδες 50% σε επίπεδο ακίδας

Χρωματογραφήματα επικάλυψης κατεψυγμένων γαρίδων με 100% επίπεδο ακίδας (8 ενέσεις)

Δεδομένα δοκιμής επαναληψιμότητας για κατεψυγμένες γαρίδες με 100% επίπεδο ακίδας

Χρωματογραφήματα επικάλυψης κατεψυγμένων γαρίδων με 150% επίπεδο ακίδας (8 ενέσεις)

Δεδομένα δοκιμής αναπαραγωγιμότητας για κατεψυγμένες γαρίδες με επίπεδο ακίδας 150%.

Δεδομένα δοκιμής Spiking για κατεψυγμένες γαρίδες

Με βάση τα δεδομένα που παρέχονται, οι χρωματογραφικές κορυφές δείχνουν καλό σχήμα και οι συντελεστές γραμμικής συσχέτισης είναι όλοι μεγαλύτεροι από 0,999. Ο προσδιορισμός των φωσφορικών αλάτων στα τρόφιμα πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας τη χρωματογραφική στήλη υδρογόνου-υδροξειδίου της NovaChrom (HS-9A-PP, 4 × 250 mm, 9μm), με αναφορά στη δεύτερη μέθοδο που καθορίζεται στο GB5009.256-2025 για τον προσδιορισμό πολλαπλών φωσφορικών αλάτων στα τρόφιμα. Τα πειραματικά αποτελέσματα δείχνουν ότι η δεύτερη μέθοδος παρουσιάζει εξαιρετική γραμμικότητα και γραμμική αναπαραγωγιμότητα. Δείχνει επίσης εκκρεμές όριο ανίχνευσης (0,003g/kg), όριο ποσοτικοποίησης (0,009g/kg) και ακρίβεια. Η μέθοδος δείχνει καλή επαναληψιμότητα, παραλληλισμό για τα δείγματα και εξαιρετικά ποσοστά ανάκτησης ακίδων. Τόσο το όριο ανίχνευσης όσο και το όριο ποσοτικοποίησης είναι πολύ χαμηλότερα από τις τυπικές απαιτήσεις των 0,05 g/kg και 0,1 g/kg, αντίστοιχα. Το RSD των περιοχών αιχμής για επαναληψιμότητα δείγματος κυμαινόταν από 0,515% έως 0,934%. Η απόλυτη διαφορά μεταξύ των δύο ανεξάρτητων προσδιορισμών που ελήφθησαν υπό συνθήκες επαναληψιμότητας για το δείγμα ήταν 0,37% του αριθμητικού μέσου όρου. Σε δοκιμές ακριβείας, η απόλυτη διαφορά μεταξύ των δύο ανεξάρτητων προσδιορισμών που λήφθηκαν υπό συνθήκες επαναληψιμότητας ήταν 0,06% του αριθμητικού μέσου όρου, που δεν υπερβαίνει την τυπική απαίτηση του 15%. Τα ποσοστά ανάκαμψης κυμάνθηκαν από 92,57% έως 102,15%. Αυτή η μέθοδος συμμορφώνεται με τις απαιτήσεις του GB5009.256-2025 για τον προσδιορισμό πολλαπλών φωσφορικών αλάτων στα τρόφιμα.

4. Συμπέρασμα

Αυτή η ανάλυση διεξήχθη χρησιμοποιώντας χρωματογράφο ιόντων Wayeal για τον προσδιορισμό πολλαπλών φωσφορικών αλάτων στα τρόφιμα σύμφωνα με τη Μέθοδο 2 του GB5009.256-2025. Η μέθοδος επιτρέπει την ακριβή ποσοτικοποίηση της περιεκτικότητας σε φωσφορικά άλατα στα τρόφιμα, επαληθεύοντας τη συμμόρφωσή τους με τα εθνικά πρότυπα (όπως το GB 5009.256-2025). Αυτό βοηθά στην αποτροπή της υπέρβασης των επιτρεπόμενων ορίων προσθέτων και υποστηρίζει την ακεραιότητα των ρυθμιστικών συστημάτων για την ασφάλεια των τροφίμων.